【LB培养基的配制】在微生物实验中,LB培养基(Luria-Bertani medium)是一种广泛使用的基础培养基,特别适用于大肠杆菌等原核生物的培养。其成分简单、营养均衡,能够支持多种细菌的生长。本文将对LB培养基的配制方法进行总结,并以表格形式清晰展示所需材料和步骤。
一、LB培养基简介
LB培养基由三部分组成:胰蛋白胨(Tryptone)、酵母提取物(Yeast Extract)和氯化钠(NaCl)。其中,胰蛋白胨提供氮源和氨基酸,酵母提取物含有丰富的维生素和微量元素,而氯化钠则维持渗透压平衡。根据实验需求,还可添加琼脂制成固体培养基,或加入抗生素用于筛选转化菌株。
二、LB培养基的配制方法
以下是配制1升液体LB培养基的基本步骤:
步骤 | 内容 |
1 | 准备蒸馏水,量取1000 mL,放入烧杯中 |
2 | 加入10 g 胰蛋白胨(Tryptone) |
3 | 加入5 g 酵母提取物(Yeast Extract) |
4 | 加入10 g 氯化钠(NaCl) |
5 | 搅拌至完全溶解 |
6 | 调节pH至7.0~7.2(可使用NaOH或HCl) |
7 | 高压灭菌(121℃,15 psi,15分钟) |
8 | 灭菌后冷却至适宜温度(约50℃)即可使用 |
如需制备固体LB培养基,可在上述步骤中加入15 g琼脂粉,按相同方式灭菌并倒入无菌培养皿中。
三、注意事项
- 所有器具需提前灭菌,避免杂菌污染。
- 配置完成后应尽快使用,避免长时间存放导致营养成分降解。
- 若需长期保存,可分装后冷冻保存,但建议在一周内使用完毕。
四、常见变体与用途
类型 | 成分 | 用途 |
LB液体培养基 | 胰蛋白胨、酵母提取物、NaCl | 常规细菌培养 |
LB固体培养基 | 添加琼脂 | 菌落分离、平板划线 |
LB + 抗生素 | 在基础LB中加入适当浓度抗生素 | 转化菌株筛选 |
LB + X-gal | 加入X-gal溶液 | 蓝白筛选(如pUC质粒系统) |
通过以上步骤和表格内容,可以快速掌握LB培养基的配制方法。实际操作时,可根据具体实验目的灵活调整配方,确保培养基的适用性和稳定性。